Aislamiento de virus aviares en cultivos celulares e identificación molecular a partir de muestras provistas por el cliente
Servicio Tecnológico ST 7463 (color 808080)
Detalle: Aislamiento e Identificación de virus aviares en muestras biológicas provenientes de pollos y aves silvestres. El servicio está dirigido a veterinarios, productores, parques Nacionales y entidades encargadas de la sanidad animal en general.
Metodología: A partir de muestras biológicas de aves con sintomatología remitidas por el cliente, se realiza el aislamiento viral mediante la infección de cultivos celulares. Luego se realiza la extracción de ácidos nucleicos (ADN o ARN) y, mediante técnicas moleculares de amplificación (PCR o RT-PCR), se detectan de manera precisa, sensible y específica regiones nucleotídicas correspondientes a los genomas de los virus presentes en la muestra. El ADN o el ARN total se obtienen a partir del cultivo infectado y se usa como molde en una reacción de PCR (Polimerase Chain Reaction) o RT-PCR (Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction), respectivamente; siempre en presencia de oligonucleótidos específicos para los virus a detectar. La visualización de los productos de amplificación, se lleva a cabo mediante electroforesis en geles de agarosa al 1,0% teñidos con un intercalante de ADN. A posteriori, y en caso de solicitud del cliente, se realiza la secuenciación de los productos amplificados.
Asimismo, si es de interés del cliente, se procede a la amplificación del virus aislado (obtención de stock viral por infección de células y pasajes sucesivos en recipientes de cultivos con mayores superficies). La titulación del stock viral se realiza por el método de dilución límite y el título se calcula por el método de Reed y Muench como la concentración en la cual el 50% de las células están infectadas ó TCID50 (50% tissue culture infectious dose).
Responsables: Zanetti Flavia, Romanutti Carina, Keller Leticia