Nanoanticuerpos y otros anticuerpos recombinantes

Laboratorio de Nanoanticuerpos y otros anticuerpos recombinantes

Investigadora Responsable Dra. Vanina Grippo

Integrantes Actuales

-Lic. Mauro González, Profesional principal CONICET.
-Lic. Florencia Marchese, Tesista de Doctorado.

Anteriores (Gracias por su aporte al grupo!)

-Dr. Joaquín Bozzo.
-Tesista de Doctorado de la FFyB-UBA. Becario CONICET. Título de la Tesis: Estudio de la utilización de anticuerpos de dominio único derivados de camélidos (VHH o Nanoanticuerpos) como nuevas herramientas en el control de la Fiebre Aftosa. 2024.
-Tesista de Licenciatura en Biotecnología de la UNSAM. Título de la Tesis: Obtención y
caracterización de anticuerpos de dominio único derivados de Camélidos (nanoanticuerpos o
VHH) específicos contra bio-marcadores plasmáticos de la Enfermedad de Alzheimer. 2016.
-Lic. Jeanette Magali De Nicola, Tesista de Licenciatura en Biotecnología de la UNSAM. Becaria
CIN. Título de la Tesis: Construcción de bibliotecas de anticuerpos de dominio único derivados de camélidos y obtención de Nano-Anticuerpos específicos contra la cepa O1 Campos del Virus de la Fiebre Aftosa. 2015.

Temas de investigación

En nuestro grupo nos especializamos en la obtención y producción de anticuerpos de dominio único derivados de Camélidos (Nanoanticuerpos o VHH) como plataforma tecnológica para el desarrollo de nuevas herramientas diagnósticas y de investigación en salud humana y sanidad animal.

Líneas de Investigación

Los anticuerpos (Acs) de dominio único representan una herramienta muy ventajosa y con características únicas posibilitando nuevas aplicaciones respecto a los otros tipos de Acs monoclonales. Una fracción de los Acs de camélidos carece de cadena liviana y del dominio CH1 de la cadena pesada, estando el sitio de combinación al antígeno (Ag) conformado por una sola región variable (VHH). Como los Acs convencionales, los VHH, o también llamados Nanoanticuerpos, muestran alta especificidad y afinidad por el blanco. Sin embargo, sus únicas y bien caracterizadas propiedades les confieren ventajas respecto a los Acs convencionales como que reconocen epitopes escondidos o no comunes, tienen flexibilidad de formato farmacológico y adaptación de la vida media, poseen alta estabilidad a cambios químicos y de temperatura.
A su vez, los VHH producidos en microorganismos suponen un ahorro significativo de costo en comparación con los métodos de producción de mAcs convencionales.
Todo esto nos llevó a establecer la plataforma tecnológica de obtención de VHH en el Instituto para la producción de nuevas herramientas con el objetivo de desarrollar inmunoensayos diagnósticos más efectivos, rápidos y económicos como así también importantes avances en el tratamiento de enfermedades infecciosas y en otras patologías de gran impacto, es decir, herramientas innovadoras en el campo de los Acs monoclonales con perspectivas terapéuticas. Actualmente estamos focalizados en las siguientes líneas de investigación:

PLATAFORMA VHH PARA APLICACIÓN DIAGNOSTICA

EN SALUD HUMANA.

PROYECTO ENFERMEDAD RELACIONADA A IgG4: “Obtención y producción de Nanoanticuerpos (o VHH) para el desarrollo de nuevas herramientas de aplicación diagnóstica en la Enfermedad relacionada a IgG4 y otras afecciones autoinmunes”

En las enfermedades relacionadas a IgG4 (ER-IgG4), un elevado porcentaje de pacientes presenta concentraciones de IgG4 sérica por encima del rango normal. La medición de la concentración de IgG4 circulante, junto a la realización de estudios histopatológicos y clínicos pertinentes, resulta en el diagnóstico definitivo de la enfermedad. Actualmente, la determinación de la concentración de IgG4 sérica se realiza por nefelometría o turbidimétria, variando según la marca de reactivos y dificultando el establecimiento de referencias internacionales de estandarización. Por esta razón, el objetivo de esta línea de investigación es
obtener y caracterizar VHH específicos contra IgG4 humana (IgG4h) para el desarrollo de un inmuensayo diagnóstico tipo ELISA. Estos nanoAcs son una herramienta con potencial aplicabilidad diagnóstica en esta enfermedad como también en otros trastornos autoinmunes.

PROYECTO ENFERMEDAD DE ALZHEIMER: “Obtención y producción de Nanoanticuerpos (o VHH) específicos contra biomarcadores relevantes para el desarrollo de un inmunoensayo diagnóstico temprano en la Enfermedad de Alzheimer”

La enfermedad de Alzheimer (EA) es un desorden progresivo degenerativo del sistema nervioso, que afecta a más de 35 millones de personas en el mundo. Se caracteriza por la acumulación de los llamados péptidos amiloides beta (Aβ) en el cerebro, los que se agregan formando oligómeros solubles (AβOs) y, posteriormente, fibras insolubles y placas extracelulares. La medición directa y temprana de biomarcadores en el suero de pacientes podría permitir el desarrollo de métodos diagnósticos simples y rentables para esta enfermedad. El objetivo de este proyecto es obtener y producir VHH específicos contra biomarcadores como nuevas herramientas para investigación y diagnóstico de la enfermedad. Se utilizará este panel de NanoAcs para realizar a futuro determinaciones en plasma y LCR de pacientes (ver colaboraciones), con el objetivo mediato de desarrollar un inmunoensayo para el diagnóstico temprano de la EA

EN SANIDAD ANIMAL

PROYECTO FIEBRE AFTOSA:“Obtención y producción de Nanoanticuerpos (o VHH) como plataforma para el desarrollo de nuevas herramientas con potencial aplicación diagnóstica en Fiebre Aftosa”.

La Fiebre Aftosa (FA) es una enfermedad viral del ganado de alto impacto económico que afecta a animales de pezuña hendida y la infección con un determinado serotipo no confiere inmunidad contra otro. Argentina ha logrado el estatus de la OIE como país libre de FA con zonas donde se aplica y donde no se aplica la vacunación. Por esto, es sumamente relevante el continuo desarrollo de tecnologías actualizadas orientadas a la prevención y diagnóstico temprano, molecular e inmunológico de esta infección. Las características únicas de los VHH nos han impulsado a la obtención y caracterización de nanoAcs contra el VFA con el objeto de desarrollar nuevas herramientas para el estudio y la innovación diagnostica de la FA.

PLATAFORMA VHH PARA APLICACIÓN BIOTECNOLÓGICA

PROYECTO IgG MURINA (PROYECTO IgGM) “Desarrollo de un nuevo método para purificación de IgGs basado en VHH”.

Este proyecto plantea el desarrollo de un método de purificación de Acs monoclonales (mAcs)
convencionales basado en nanoAcs que reconozcan con alta afinidad y especificidad la IgG murina. El uso de este tipo de Acs como ligando de afinidad le podría otorgar al producto final propiedades únicas con respecto a su alta estabilidad, afinidad y especificidad. Se trabaja con la perspectiva de ampliar la plataforma para obtener nanoAs contra IgGs de otras especies de interés en el campo veterinario como de salud humana.

Desarrollo y Transferencia tecnológico
Servicios ofrecidos

ST 4318: Generación de anticuerpos de dominio único derivados de camélidos (VHH o Nanoanticuerpos) a partir de antígenos proteicos o células. (Contacto: vgrippo@centromilstein.org.ar)

ST 4319: Modificación de anticuerpos de dominio único derivados de camélidos (VHH o Nanoanticuerpos). (Contacto: vgrippo@centromilstein.org.ar)

ST 4320: Caracterización de bibliotecas de anticuerpos de dominio único derivados de camélidos (VHHs o Nanoanticuerpos). (Contacto:
vgrippo@centromilstein.org.ar)

Colaboraciones actuales

Dra. Diana Jerusalinsky y equipo (Facultad de Medicina-UBA) en el marco del Proyecto
“Anticuerpos de cadena única capaces de neutralizar oligómeros de péptidos β-amiloides para diagnóstico temprano y terapia génica experimental de la Enfermedad de Alzheimer”
conjuntamente con el Dr. Ricardo Allegri y equipo del INEU (FLENI-CONICET).
Dra. Ernestina Angarola del Hospital Italiano. Título del proyecto: Estudio de la utilización de nanoanticuerpos específicos contra IgG4 humana como nueva herramienta en el diagnóstico y seguimiento de la Enfermedad relacionada con IgG4, aprobado Comité de Ética de Proyectos de Investigación (CEPI) en 2023.

Publicaciones más recientes y/o relevantes

• Thomaz Soccol V., Chávez-Olórtegui C., Machado de Ávila RA., Alvarenga LM., Castro GR., Grippo V. International Course Manual, IDENTIFICATION OF PROTEIN EPITOPES (PHAGE DISPLAY, SPOT- SYNTHESIS AND BIOINFORMATICS ANALYSIS), ANTIGEN SYNTHESIS, ENCAPSULATION AND EVALUATION. 2023. CNPq/MCTIC/CABBIO-BR03 pg 1-83.
• Grippo V. Chapter 5 - Antibody Phage display. International CABBIO Course Manual
IDENTIFICATION OF PROTEIN EPITOPES (PHAGE DISPLAY, SPOT-SYNTHESIS AND
BIOINFORMATICS ANALYSIS), ANTIGEN SYNTHESIS, ENCAPSULATION AND EVALUATION. 2023. CNPq/MCTIC/CABBIO pg 53-58.
• Niborski L., Potenza M., Renato G.S., Simonetti L., Ossowski M., Grippo V., Mayd M., Staquicini D., Parodi-Talicef A., Robello C., Comini M.A., Alonso G.D., Raats J.S.H., Gómez K.A.. Recombinant antibody against Trypanosoma cruzi from patients with chronic Chagas heart disease recognizes mammalian nervous system. EBioMedicine; 2021 vol. 63. Q1.
• Niborski L., Grippo V., Lafón S., Levitus G., García Bournissen F., Ramirez J.C., Burgos J.M., Bisio M., Ayala V., Coppede M., Herrera V., Romano C., López C., Contreras A., Gómez, K.A., Elean J., Mujica H., Schijman A.G., Levin M.J., Longhi S.A. Serological based monitoring of a cohort of chronic Chagas disease patients treated with benznidazole in a highly endemic area of Northern Argentina. Mem Inst Oswaldo Cruz. 2016; 111 (6): 365-71. IF 2.605 Q1
• McCoy L, Rutten L, Frampton D, Anderson I, Granger L, Bashford R, Dekkers G, Strokappe NM, Seaman MS, Koh W, Grippo V, Kliche A, Verrips T, Kellam P, Fassati A, Weiss RA. Molecular evolution of broadly neutralizing llama antibodies to the CD4-binding site of HIV-1. PLoS Pathog. 2014 Dec 18; 10 (12): e1004552. IF 8.86 Q1

Presentaciones en reuniones científicas

• Alfaro ME; Oberholzer MV; Habif M; Campos MR; Grippo V; Calandri I; Sebollela A; Allegri RF; Jerusalinsky D. Biomarcadores en etapas tempranas de la enfermedad de Alzheimer (EA) y su posible correlación con cambios cognitivos. Asociación Neuropsiquiatrica Argentina (ANA). 2024
• Alfaro ME; Oberholzer MV; Habif M; Campos MR; González MB; Grippo V; Calandri I; Sebollela A; Allegri RF; Jerusalinsky D. Development of an ultrasensitive ELISA for the detection of Amyloid Beta oligomers (ABetaOs): implications for early diagnosis of Alzheimer's disease (AD). SAIC, Revista Medicina, Vol. 84 Supl. V, pag.149. 2024.
• Grippo V; Bozzo JI; Russo MJ; Oberholzer MV; Sebollela A; Allegri RF; Jerusalinsky D.
Recombinant antibodies against putative biomarkers for research and early diagnosis of
Alzheimer´s Disease. LATBrain 2022.
• Bozzo, J; Marchese F, Grippo, V. Estudio de factibilidad de anticuerpos de dominio único
derivados de camélidos (VHH o Nano-anticuerpos) como anticuerpos de captura en un ELISA de bloqueo en fase líquida para detectar anticuerpos inducidos tras la vacunación contra el VFA. XIII Congreso Argentino de Virología 2021.
• Bozzo, J; Marchese F, Grippo, V. Feasibility studies of camelid-derived single domain antibodies (VHH or nanobodies)as capture antibodies in a liquid phase blocking ELISA to detect antibodies elicited after FMDV vaccination. VI Reunión Científica de la Alianza Mundial para la Investigación de la Fiebre Aftosa (GFRA). 2021
• Marchese F, Bozzo J, Lopez N, Grippo V. Characterization of specific camelid single domain
antibodies, VHH or nanobodies, against human IgG4 for diagnostic application in IgG4 related
disease. Reunión Anual de Sociedades de Biociencias. 2021
• Bozzo, J; Marchese F, Malirat, V, Grippo, V. Estudio de la utilización de anticuerpos de dominio único derivados de camélidos (VHH o nanoanticuerpos) como anticuerpos de captura en ELISA-BFL empleado para el control de la potencia de la vacuna anti-aftosa. X Jornadas de Jóvenes Investigadores FVET UBA. 2021