Investigadora Responsable: Gabriela Canziani

En el laboratorio se estudian la conformación y mecanismos de reconocimiento específico antígeno-anticuerpo utilizando un biosensor Biacore (SPR). Específicamente se estudian y evalúan nanoanticuerpos (o VHHs) contra blancos específicos de agentes infecciosos, para su utilización como antivirales y/o análisis de vacunas.

Líneas de Investigación

A) El estudio de la conformación y de los mecanismos de reconocimiento específico por ligando y anticuerpo de las proteínas asociadas a membrana. Empleamos como modelo la envoltura, Env, del virus de la inmunodeficiencia humana (VIH-1) y anticuerpos específicos (IgG humanos) o fragmentos de anticuerpo de llama (nanoanticuerpos o secuencias VHH) como herramientas.

Utilizamos anticuerpos humanos anti-Env del VIH-1 de amplio espectro y anticuerpos neutralizantes y no neutralizantes ya descritos y, por el momento, el nanoanticuerpo rotulado 2H10, que fue obtenido de una librería inmune de llama (Lutje Hulsik, D. et al. 2013, PLoS Pathog. 9, e1003202). Este NAc se une a la región próxima a membrana (MPER) del gp41 de la Env viral. Este trabajo se realiza en colaboración con el Laboratorio de Virología Molecular e Ingeniería de los anticuerpos en ICT Milstein, liderado por la Dra Ibañez, el Laboratorio de las Proteínas en el Dpto. de Bioquímica y Biología Molecular de la Escuela de Medicina de la Universidad Drexel de Filadelfia, liderado por el Dr. Irwin Chaiken, y el Laboratorio de Entrada Retroviral del Dpto. de Microbiología, Infectología e Inmunología del Centro Hospitalario de la Universidad de Montréal, liderado por el Dr. Andrés Finzi.

B) El análisis del mecanismo de unión de Nanoanticuerpos (NAc) contra blancos específicos de diversos agentes infecciosos para apoyar la generación de antivirales y/o análisis de vacunas para el tratamiento de enfermedades virales

Estamos preparando los constructos a partir de secuencias de las glicoproteínas inmunogénicas del VIH-1, de aislamientos primarios, para inmunizar llamas con dominios del Env en distintas conformaciones; luego, extraer las secuencias de los fragmentos de cadena pesada (VHH) del repertorio inmune de la llama y, finalmente, construir bibliotecas para seleccionar nanoanticuerpos contra distintos dominios críticos de gp120 y de gp41. Los NAcs seleccionados se caracterizarán por métodos basados en ELISA celular, SPR (biosensor), Citometría de Flujo, y fluorometría.

Publicaciones

ME Iezzi, L Policastro, S Werbajh, O Podhajcer, G Canziani. Single-domain antibodies and the promise of modular targeting in cancer imaging and treatment. Research Topics Frontiers Immunology. Accepted for publication January 2018.

Garaicoechea L, Aguilar A, Parra GI, Bok M, Sosnovtsev SV, Canziani G, Green KY, Bok K, Parreño V. Llama nanoantibodies with therapeutic potential against human norovirus diarrhea. PLoS One. 2015 Aug 12: 10 (8):e0133665. doi: 10.1371/journal.pone.0133665.

Canziani GA, Melero JA, Lacy ER. Characterization of neutralizing, affinity-matured human respiratory syncytial virus F binding antibodies in the sub-picomolar affinity range. J Mol Recognit. 2012 Mar; 25(3):136-46. doi: 10.1002/jmr.2149.

Teplyakov A, Obmolova G, Canziani G, Zhao Y, Gutshall L, Jung SS, Gilliland GL. His-tag binding by antibody C706 mimics β-amyloid recognition. J Mol Recognit. 2011 Jul-Aug; 24(4):570-5. doi: 10.1002/jmr.1069.

Wu SJ, Luo J, O’Neil KT, Kang J, Lacy ER, Canziani GA, Baker A, Huang M, Tang QM, Raju TS, Jacobs, SA, Teplyakov A, Gilliland GL, Feng Y. Structure-based engineering of a monoclonal antibody for improved solubility. Protein Eng Des Sel. 2010, Aug;23(8):643-51. doi: 10.1093/protein/gzq037 .

Duffy K.E., Lamb RJ, San Mateo LR, Jordan JL, Canziani GA, Brigham-Burke M, Korteweg J, Cunningham M, Giles-Komar J, Duchala C, Sarisky RT, Lamine Mbow M. Down-Modulation of Human TLR3 Function by a Monoclonal Antibody. Cell Immunol. 2007, 248,103-14.

Canziani GA*, Pashov A*, Monzavi-Karbassi B, Kaveri SV, Macleod S, Saha R, Perry M, Van Cott T, Kieber-Emmons T. Antigenic properties of peptide mimotopes of HIV-1-associated carbohydrate antigens. J. Biol. Chem. 280, 28959-28965, 2005, (*igual contribución).

Canziani GA, Klakamp S, Myszka DG. Kinetic Screening of Antibodies from Crude Samples. Anal.Biochem. 325, 301-307, 2004.

Hoffman T L, Canziani GA, Jia L, Rucker J, Doms RW. A novel biosensor assay for studying ligand-membrane receptor interactions Proc. Natl. Acad. Sci. USA 2000, 97, 11215-11220 73.

Subsidios

ANR-800 2012 C2-190/12- Fondo Tecnológico Argentino (FONTAR) y Plena Salud, Universidad Abierta Interamericana (UAI), Investigadores Responsables (GA Canziani y Dra Alicia Fuchs, Directora del CAECIHS, UAI). Título: “Desarrollo del Diagnóstico Rápido (PDR) de infecciones crónicas parasitarias. Caso de la hidatidosis cística causada por metacestodes (larva) de Echinococcus granulosus.”

EMPRETECNO-EBT #50 (FONARSEC), 2013-2017, Miembro Grupo Colaborador y Representante Administrativo del Proyecto (RAP). Título: “Desarrollo de nanopartículas Inteligentes para la terapia del cáncer.” IIBBA (CONICET) e INIS-Biotech (Fundación Instituto Leloir).

PVCE CONICET-CSIC. Investigador beneficiado. Estadía breve en el Laboratorio de Protein Tools, Dr L. Kremer en el Centro Nacional de Biotecnología (CNB), Consejo Superior de Investigaciones Científicas (CSIC) Campus Universidad Autónoma de Madrid; para el desarrollo de protocolos de caracterización de nanoanticuerpos empleando VLPs como antígeno.

PICT startup 2014-3776, FONCyT, Investigador Responsable, Título: “Viral-like Particles (VLP) para su uso en inmunización y en ‘screening’ de anticuerpos acoplados a nanomedicamentos para la internalización.”